Aislamiento de Cryptococcus gattii serotipo B a partir de detritos de Eucalyptus spp. en Colombia / Isolation of Cryptococcus gattii serotype B from detritus of Eucalyptus trees in Colombia

Introducción. Cryptococcus gattii serotipo B ha sido asociado con diferentes especies de árboles en regiones tropicales y subtropicales. Este serotipo es el segundo de mayor importancia clínica en Colombia, pero no se había recuperado del ambiente en ninguno de los estudios realizados por nuestro grupo. Objetivo. Para establecer la presencia y distribución de las especies del complejo C. neoformans, especialmente del serotipo B, y determinar algunas características fenotípicas relacionadas con la virulencia de los aislamientos recuperados, se diseñó un muestreo de material vegetal en un bosque de piso térmico frío del departamento de Cundinamarca. Materiales y métodos. Durante febrero y marzo de 2003 se realizaron 4 muestreos en el bosque y se tomaron 167 muestras de detritos de eucaliptos y 28 muestras de otras especies de árboles, las cuales se procesaron empleando el método convencional de extracción y siembra en medio selectivo. Se determinó el tamaño celular y capsular en los filtrados, el crecimiento a 37°C, la virulencia en un modelo animal y la pareja sexual por PCR. Resultados. Se aisló C. gattii serotipo B de 46 muestras de eucaliptos (27,5 por ciento ). El tamaño celular en el extracto estuvo entre 3,10 y 4,15 µm y el tamaño capsular entre 0,30 y 0,46 µm. Los 46 aislamientos crecieron a 37°C, pero ninguno de los dos aislamientos empleados causó la muerte de los animales inoculados durante los 70 días de observación. Todos los aislamientos fueron pareja sexual a. Conclusiones. Este estudio es el primer informe sobre el aislamiento de C. gattii, serotipo B, pareja sexual a, en Colombia a partir de detritos de eucaliptos

Caracterización fenotípica de aislamientos ambientales de Cryptococcus neoformans / Phenotypical characterization of Cryptococcus neoformans environmental isolates

La criptococosis es causada por las tres variedades de Cryptococcus neoformans, las cuales presentan diferencias fisiológicas y de virulencia, algunas de las cuales se han estudiado para reconocer aspectos de su biología. Este trabajo evaluó las características fenotípicas de aislamientos ambientales de las variedades grubii y gattii, con el fin de establecer diferencias asociadas con el ciclo de vida y la virulencia. Se estudiaron 28 aislamientos serotipo A y 31 serotipo C. Se evaluaron la morfología macroscópica y microscópica de blastoconidias cultivadas en agar Sabouraud y suelos, el crecimiento a 37øC, la producción de 22 enzimas extracelulares, la frecuencia del fenómeno de fructificación haploide, la pareja sexual, el patrón de sensibilidad a toxinas asesinas ( killer) y la virulencia en ratones Balb/c. No se observaron diferencias entre las dos variedades en la morfología macroscópica, la microscópica, ni en el crecimiento a 37ºC ( p>0,05); sin embargo, se observó disminución del tamaño celular y capsular de blastoconidias cultivadas en suelo comparado con el tamaño en Sabouraud ( p<0,05). Adicionalmente, se observó mayor actividad enzimática de proteasas, fosfolipasas, fenoloxidasa y b-glucosidasa en los aislamientos de la variedad grubii al compararlos con los aislamientos de la variedad gattii ( p<0,05). En las dos variedades se observaron estructuras relacionadas con fructificación haploide y todos los aislamientos fueron pareja sexual alfa. Los patrones killer en los aislamientos de la var. grubii fueron el I y el II; en contraste, en la var. gattii se encontraron 7 patrones I, V, IX-XIII. En el modelo animal encontramos que 12 de 22 (54,5 por ciento) aislamientos de la var. grubii causaron la muerte durante el periodo de observación, en tanto que ninguno de los 14 de la var. gattii la causó. La disminución del tamaño de las blastoconidias en suelo y la frecuencia de la pareja alfa con estructuras relacionadas con fructificación haploide sugieren un mecanismo importante para la producción de partículas infecciosas en la naturaleza. Adicionalmente, la mayor actividad enzimática de la var. grubii podría asociarse con su virulencia en el modelo animal.

Recuperación de Cryptococcus neoformans var gattii serotipo C a partir de detritos de almendros / Recovery of Cryptococcus neoformans var gattii serotype C from almond trees detritus

Durante 1996-1997, se llevó a cabo en Cúcuta un estudio para determinar el hábitat de Cryptococcus neoformans var. gattii debido debido a que los casos clínicos ocasionados por esa varidad se presentan con alta frecuencia en dicha ciudad. A partir de 2 de 68 almendros (Terminalia catappa) localizados y estudiados en la ciudad, se logro aislar C. neoformans var gatti serotipo C. El objetivo del presente trabajo fue realizar un seguimiento de los dos almendros positivos, con el fin de evaluar el tiempo de permanencia del hongo en asocio con los detritos en diferentes épocas del año. Se tomaron muestras de los dos árboles durante 26 meses y de 9 almendros adicionales; las muestras se extrajeron con una solución tampón fosfato suplementada con antibióticos; el extracto se sembró en medios selectivos y se identificó la especie con base en la morfología macro y microscópica y en pruebas bioquímicas. La determinación de la variedad y el serotipo se realizó con el empleo de técnicas estandarizadas. Del total de 160 muestras de los dos almendros, 31 (19,3 por ciento) fueron positivas para C. neoformans var gattii serotipo C así como una muestra de 1 de los 9 almendros adicionales. Estos hallazgos confirman que el almendro (Terminalia catappa) pude tener algún papel como planta intermediaria para la var. gattii y, además, que la variedad está presente en el área durante todo el año, ya que se logró recuperar en diferentes meses a lo largo de todo el estudio